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“腸道護(hù)衛(wèi)菌”——雙歧桿菌的分離、培養(yǎng)及鑒定分享

發(fā)布時(shí)間：

2020-04-18

一、雙歧桿菌到底長什么樣

雙歧桿菌，顧名思義，首先它是桿菌（桿菌？自己先腦補(bǔ)一下棍子的樣子），而且是革蘭氏陽性桿菌（革蘭氏陽性菌最顯著的特點(diǎn)是細(xì)菌被革蘭染色后在顯微鏡下呈紫色）。而由于其末端常常分叉，故名為雙歧桿菌。雙歧桿菌肉眼是無法看到的，所以我們只能借助顯微鏡來看清它真實(shí)的面目。

雙歧桿菌是1899年由法國Tissier博士從母乳營養(yǎng)兒的糞便中分離出的，不運(yùn)動(dòng)、無芽孢、形態(tài)多變的桿菌。最適生存溫度為（37～42）℃，最適pH值6.5～7.0，廣泛存在于人和動(dòng)物的消化道、口腔等環(huán)境中。

二、雙歧桿菌對(duì)人類的作用

這么微小的，需要借助顯微鏡才能看到的雙歧桿菌到底對(duì)人類有什么用？

雙歧桿菌是一種重要的腸道有益微生物。其作為一種生理性有益菌，對(duì)人體健康具有生物屏障作用、營養(yǎng)作用、免疫增強(qiáng)作用、改善胃腸道功能等多種重要的生理功能。雙歧桿菌數(shù)量的多少，是判斷人體健康的晴雨表。

不僅僅如此，雙歧桿菌還能抑制人體有害細(xì)菌的生長，抵抗病原菌的感染，合成人體需要的維生素，促進(jìn)人體對(duì)礦物質(zhì)的吸收，促進(jìn)排便、凈化腸道環(huán)境、刺激人體免疫系統(tǒng)等，對(duì)促進(jìn)人體健康發(fā)揮重要作用。

三、雙歧桿菌的檢測方法

既然它這么重要（so important），又這么微?。?span lang="EN-US">so small），那我們?nèi)绾卧谄綍r(shí)食用的食品中檢測它的存在？下面簡述雙歧桿菌的選擇性篩選和鑒定方法。

1、樣品制備

1.1 樣品的全部制備過程均應(yīng)遵循無菌操作程序。

1.2 以無菌操作稱取25g（mL）樣品，置于裝有225mL生理鹽水的滅菌錐形瓶內(nèi)，制成1:10 的樣品勻液。

2、稀釋及涂布培養(yǎng)步驟

2.1 用1mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1.0mL，沿管壁緩慢注于裝有9mL 生理鹽水的無菌試管中（注意吸管尖端不要觸及稀釋液），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。

2.2 另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭，按2.1操作順序，做10 倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋一次，即換用1 次1mL滅菌吸管或吸頭。

2.3 根據(jù)待鑒定菌種的活菌數(shù)，選擇三個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1mL 稀釋液，接種在雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板,或取0.1mL適當(dāng)稀釋度的樣品勻液均勻涂布在雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板。36℃±1℃厭氧培養(yǎng)48h±2h,可延長至72h±2h。

圖1 雙歧桿菌在MRS篩選平板上的菌落形態(tài)

3、純培養(yǎng)

挑取3個(gè)或以上的單個(gè)菌落接種于雙歧桿菌瓊脂平板或MRS瓊脂平板。36 ℃±1℃厭氧培養(yǎng)48h±2h,可延長至72h±2h。

4、菌種鑒定

4.1 涂片鏡檢:挑取雙歧桿菌平板或MRS平板上生長的雙歧桿菌單個(gè)菌落進(jìn)行染色。雙歧桿菌為革蘭氏染色陽性,呈短桿狀、纖細(xì)桿狀或球形,可形成各種分支或分叉等多形態(tài),不抗酸,無芽孢,無動(dòng)力。

圖2 雙歧桿菌在顯微鏡下的形態(tài)觀察

4.2 生化鑒定

過氧化氫酶試驗(yàn)為陰性。選取純培養(yǎng)平板上的三個(gè)單個(gè)菌落，分別進(jìn)行生化反應(yīng)檢測，不同雙歧桿菌菌種主要生化反應(yīng)見國標(biāo)附錄B。

四、應(yīng)用討論

雙歧桿菌在人類食品、醫(yī)藥和保健等領(lǐng)域已經(jīng)得到較廣泛的應(yīng)用，而在動(dòng)物或畜禽等應(yīng)用相對(duì)有限。限制其應(yīng)用的主要因素包括：菌株來源不明確，黏附特異性和定植效率低；對(duì)氧氣和溫度環(huán)境敏感，耐氧性及穩(wěn)定性低，不利于生產(chǎn)和實(shí)際應(yīng)用；發(fā)酵條件要求高，發(fā)酵水平低，工業(yè)生產(chǎn)成本壓力大等。因此，篩選具有良好技術(shù)性能，包括耐氧、耐熱、耐酸耐膽鹽及良好發(fā)酵性能菌株對(duì)后期生產(chǎn)和應(yīng)用具有重要意義。