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培養(yǎng)基：Eosin Methylene Blue Agar（EMB）（一）

發(fā)布時間：

2025-06-05

伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB 瓊脂）又稱曙紅亞甲藍(lán)瓊脂，是一種鑒別微生物培養(yǎng)基，可抑制革蘭氏陽性菌的生長，并利用顏色指示劑區(qū)分乳糖發(fā)酵菌（如大腸桿菌）和非發(fā)酵菌（如沙門氏菌和志賀氏菌）。該培養(yǎng)基廣泛用于臨床腸道病原菌分離、水質(zhì)和食品糞便污染檢測（如大腸埃希氏菌指示污染）。從事 EMB 培養(yǎng)基相關(guān)工作的人員常提出以下問題：

伊紅（紅色）、亞甲藍(lán)（藍(lán)色）及其混合液均非綠色，綠色光澤從何而來？

為何有些糖發(fā)酵菌會產(chǎn)生綠色光澤，而另一些則不會？

有時在培養(yǎng)基中觀察到藍(lán)色菌落，原因是什么？

帶著這些疑問我們先來看看EMB的原理：

選擇性：抑制革蘭氏陽性菌

作用成分：亞甲藍(lán)和伊紅通過破壞細(xì)胞膜通透性，抑制葡萄球菌、鏈球菌等革蘭氏陽性菌生長。

鑒別性：基于乳糖發(fā)酵的 pH 染色

核心邏輯：細(xì)菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸→pH 下降→染料顯色差異。

關(guān)鍵 pH 閾值：

? pH<4.9：伊紅與亞甲藍(lán)形成紫色復(fù)合物，呈現(xiàn)綠色金屬光澤（如大腸桿菌，pH 4.81）。

? pH 4.9-6.0：僅伊紅著色，菌落呈粉 / 紅色（如產(chǎn)氣腸桿菌，pH 5.34）。

? pH>7.0：亞甲藍(lán)著色，菌落無色或淺色（如沙門氏菌，pH 8.24）。

敲重點：

綠色金屬光澤源于伊紅與亞甲藍(lán)在 pH<4.9 時通過離子鍵和氫鍵形成的大分子復(fù)合物，該復(fù)合物在菌落表面形成微小晶體顆粒，經(jīng)光線漫反射和干涉呈現(xiàn)金屬光澤，而非簡單顏色混合（如大腸埃希氏菌劇烈發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸觸發(fā)此過程）。

產(chǎn)酸量不足：弱乳糖發(fā)酵菌（如肺炎克雷伯菌）產(chǎn)酸較少，pH 通常維持在 5.0-6.0，僅能使伊紅 Y 單獨著色，形成粉紅色或紅色菌落，因無法觸發(fā)伊紅與亞甲藍(lán)復(fù)合物的形成，故不能產(chǎn)生綠色金屬光澤。

蔗糖發(fā)酵的干擾：部分腸桿菌（如產(chǎn)氣腸桿菌）同時發(fā)酵蔗糖和乳糖，產(chǎn)酸路徑復(fù)雜，可能導(dǎo)致 pH 波動，難以穩(wěn)定降至 4.9 以下，從而無法產(chǎn)生綠色金屬光澤。

染料比例影響：若培養(yǎng)基中伊紅與亞甲藍(lán)比例失衡（如 > 6:1），即使 pH 符合要求，過量伊紅會掩蓋復(fù)合物的綠色，使菌落顏色偏紅，無法產(chǎn)生綠色金屬光澤。

培養(yǎng)基中出現(xiàn)藍(lán)色菌落的可能原因：

非乳糖發(fā)酵菌的特征性表現(xiàn)

沙門氏菌、志賀氏菌、變形桿菌等非乳糖發(fā)酵菌無法分解乳糖，培養(yǎng)基 pH 維持中性（7.0）或因蛋白質(zhì)代謝呈堿性（pH>7.0）。此時亞甲藍(lán)（堿性染料）占主導(dǎo)，被細(xì)菌吸附后形成藍(lán)色或藍(lán)紫色菌落（伊紅 Y 在堿性條件下著色能力弱）。

細(xì)菌非糖代謝產(chǎn)堿

部分革蘭氏陰性菌（如假單胞菌、產(chǎn)堿桿菌）通過分解蛋白胨產(chǎn)生氨（NH?）等堿性物質(zhì)，導(dǎo)致 pH 升高。典型表現(xiàn)為菌落本身呈深藍(lán)色，且周圍培養(yǎng)基因堿性增強出現(xiàn)藍(lán)色暈圈。

培養(yǎng)基配制或儲存不當(dāng)

初始 pH 偏高（>7.5）或亞甲藍(lán)濃度異常（如比例失衡）；

瓊脂干燥或儲存污染，均可能導(dǎo)致菌落呈現(xiàn)藍(lán)紫色。

小結(jié)：

EMB 瓊脂的綠色光澤本質(zhì)是細(xì)菌代謝、染料化學(xué)與光學(xué)物理共同作用的結(jié)果，是微生物學(xué)中 “表型 - 代謝 - 環(huán)境” 關(guān)聯(lián)的經(jīng)典案例。綠色光澤的三大要素：